Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1改进型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次浮现肝细胞自身抗棒状到浮现1标准型白血病诊断病征的成果率在老年人时期就有不太好的详细描述，多个肝细胞自身抗棒状感染性的老年人里有70%在血清转换后10周内患上白血病，而随访15年的老年人这一比率减小到84%。远比之下，占有诊断1标准型白血病一半以上的标准型1标准型白血病的胃癌机制还很难得到前提的数据分析。

越来越多的人开始用到分期系统会来定义1标准型白血病的成果：个棒状在浮现多种肝细胞自身抗棒状时重回第1前期，浮现食欲持续性时重回第2前期，浮现病征时重回第3前期。一些多发肝细胞自身抗棒状感染性的个棒状，在1期和2期，成果更快，并发展为胃癌的1标准型白血病。我们以后详细描述了四四组在首次检测到多种肝细胞自身抗棒状抽样后据估计10年无白血病的极很慢成果者，这四组病变人数极多，但特质更加明确。随后，我们发现肝细胞自身蛋白质基因表达CD8+T该线粒体反应会在成果比更快的病变里基本不存在，但在近期胃癌和长期存在的白血病病变里很容易检测到。这可能确实，与成果病变远比，这些病变免疫反应会的调节增强。

后期数据分析确实，尽管调节性T该线粒体(Treg)比例正常，但白血病病变存在一些机能毛病，其里除此以外对IL-2的反应会能力也降低。此外，白血病病变里的不稳定性CD4+T该线粒体可能对调节颇具抵抗性，展示出为不稳定性T该线粒体的选择性移向，共存激发的Treg和棒状外激发的正向Treg，以及蛋白质经历的CD4+T该线粒体里IL-2反应会移向。本数据分析的借以是详细描述了CD4+调节性T该线粒体(Treg)在一小群极比更快成果者里的特质，他们的平均总人数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

分析方法：BOX数据分析是一项以人群为基础的侧向数据分析，在21岁请注意胃癌的病变直系亲属里检查1标准型白血病的危险因素。我们以后详细描述了长期比更快成果者的特质，他们保持多重肝细胞自身抗棒状感染性超过10年，但很难浮现白血病的诊断病征，很慢性或非变性免疫。随后，10名在此期间保持无白血病并愿意提供大量血液抽样的比更快成果者纳入T和B该线粒体机能数据分析。在现今的数据分析里，8名很慢成果者(SP四组)，里位总人数43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肝细胞自身抗棒状感染性。所有的参与者都正处于1标准型白血病成果的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身抗棒状对某些蛋白质的感染性反应会，然而，一名病变现在正处于2期据估计6年，但很难浮现诊断病征，一名病变被诊断为白血病，该受试者72岁，在野外测试抽样时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在数据数据分析里对该NADPH同步进行了单独数据分析。分离外周血单个核该线粒体(PBMCs)，采用多参数流式该线粒体心法和T该线粒体选择性试验数据分析NADPH里Treg的高频率、表标准型和机能。用到FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和重生)同步进行无全权负责聚类数据分析，数据分析Treg表标准型。

结果：与健康NADPH远比，来自很慢成果棒状的清醒CD4+T该线粒体的全权负责聚类揭示，酪氨酸的清醒CD4+ Treg高频率减小，与糖皮质激素正向的TNFR相关蛋白(GITR)隐含减小有关。一名HbA1c增高的病变与成果比更快者和也就是说的对照四组远比，Treg谱有所不同。机能数据分析确实，与健康NADPH远比，来自比更快成果棒状的Treg内源性的CD4+不稳定性T该线粒体选择性引人注意毁坏。展示出为对不稳定性CD4+T该线粒体CD25和CD134隐含的选择性减小。

示意图1 深入的表标准型数据分析揭示，CD4+Treg亚标准型在很慢成果表头里减小。由FlowSOM分解成的Treg室，涌进在来自所有NADPH的活CD4+CD45RA -该线粒体上。根据上标物隐含鉴定出10个元簇:清醒T该线粒体_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T该线粒体;HLA-DR + GITR +清醒T该线粒体;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)用到9个不同Treg上标分解成的10个元簇的MST。每个路由亦然一个空降兵(100个空降兵)，较大的元空降兵(10个元空降兵)在路由四组周围上色。每个路由里的饼示意图问到单个上标的隐含级别。(b)每个元聚类的热示意图，以揭示整棒状上标隐含。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)分解成示意图，以及FlowSOM辨认的每个元簇的覆盖层。(e-l)远比较轻元素为每个metacluster筒曲该线示意图(轻元素> 0.05%)明确为HD和SP四组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T该线粒体(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T该线粒体(l)。红色带子亦然ACSSP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对标记秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 用到CITRUS的预测模标准型证实，Treg高频率的减小是成果比更快的标志。分级门控(a - f)和柑橘数据分析(g-k)比较SP参与者和也就是说的HD参与者在CD4+CD45RA−T该线粒体上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群棒状的亦然性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR隐含同步进行分离，模拟FlowSOM群棒状。(b) HD(环纹)和SP(蓝点)四组以及NADPHSP 606(红色)里CD25+ cd127的高频率概述示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控邻域的筒曲该线示意图;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)木瓜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含气压示意图例，左下角突出的簇被辨认为SP和HD表头之间的不同。(j)筒曲该线示意图揭示了在SP(蓝点)和HD(灰点)四组里，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的远比较轻元素(比率)。(k)直方示意图揭示每个簇的表标准型(粉红色)和Treg上标远比较隐含与背景隐含(黄色);上列，存储器Treg_3;一个大一行，存储器Treg_4。背景与所有其他簇里上标的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对标记秩检验

示意图3 与健康献血者远比，成果比更快者清醒treg的GITR减小。每个清醒CD4+T该线粒体元簇(清醒T该线粒体_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T该线粒体;HLA-DR + GITR +清醒T该线粒体;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个隐含上标的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)表头的隐含热示意图(sp606不除此以外在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR隐含串接，揭示直方示意图(c)和概述示意图(d)。Wilcoxon配对标记秩和检验，p< 0.07(红色)所有NADPH除此以外，p< 0.05(黄色)NADPHSP 606和也就是说的HD不除此以外在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR隐含，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(红色)串接，揭示直方示意图(e)和概述示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对标记秩检验

示意图4 来自比更快成果的CD4+ treg该线粒体遏制不稳定性CD4+T该线粒体的能力也降低。SP四组用黄色的该线和带子问到，HD四组用白色的该线和带子问到，红色的该线/带子问到NADPHsp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T该线粒体同步进行分选。CD4+CD25−(转发者)被上标为CFSE, Treg按观察的比率溶液。用抗CD3 /28微珠转化该线粒体，培育3在此之后同步进行流式该线粒体心法检测。(a-d)与CD4+转发者远比较应的treg培育(自棒状)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培育。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE选择性一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性一般而言。用到感染性对照(酪氨酸的作出反应会该线粒体含treg)量化选择性一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

示意图5 不稳定性CD4+T该线粒体对比更快成果的T该线粒体转化的选择性更敏感。SP四组用黄色的该线和带子问到，HD四组用白色的该线和带子问到，红色的该线/带子问到NADPHsp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T该线粒体同步进行分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel上标，treg按观察的比率溶液。用抗CD3 /28微珠转化该线粒体，培育3在此之后同步进行流式该线粒体心法(CD25反染)和该线粒体因子数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同培育。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE选择性前年(b)。(c,d) CD25选择性前年(c)和CD134选择性前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育里的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自比更快成果子的转化清醒CD4+Treg在GITR隐含里得到了拓展和丰富，强调了进一步数据分析Treg在1标准型白血病风险个棒状里的差异性的不足之处。

书名出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28