Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1同型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次不止现肝细胞自身免疫到不止现1HG白血病针灸腹泻的重大突破率在婴幼儿时期就有很好的所述，多个肝细胞自身免疫之中性的婴幼儿之中有70%在血液转换后10年内中风白血病，而随访15年的婴幼儿这一总和缩减到84%。来得之下，占针灸1HG白血病一半以上的HG1HG白血病的得病功能还未得到充分的研究课题。

愈发多的人开始应用于仍须系统来定义1HG白血病的重大突破：个体在不止现多种肝细胞自身免疫时转到第1之前，不止现摄入量异常时转到第2之前，不止现腹泻时转到第3之前。一些多发肝细胞自身免疫之中性的个体，在1期和2期，重大突破较太快，并发展为得病的1HG白血病。我们此前所述了一小组在首次扫描到多种肝细胞自身免疫抽取后将近10年无白血病的更太快重大突破者，这小组腹泻人数少，但构造更加说明。随后，我们推测肝细胞自身上皮细胞甲基化CD8+T巨噬细胞反应在重大突破平稳的腹泻之中基本不普遍存在，但在近期得病和仍然普遍存在的白血病腹泻之中很容易扫描到。这显然证明，与重大突破腹泻来得，这些腹泻自身免疫反应的调节减太快。

早期研究课题证明，尽管调节性T巨噬细胞(Treg)数量正常人，但白血病腹泻普遍存在一些功能弱点，其之中包含对IL-2的反应并能下降。此外，白血病腹泻之中的畸变CD4+T巨噬细胞显然对调节更为重要抵抗性，展示出为畸变T巨噬细胞的消除移向，其本质转化成的Treg和体外转化成的诱导Treg，以及上皮细胞经历的CD4+T巨噬细胞之中IL-2反应移向。本研究课题的最终目标是所述了CD4+调节性T巨噬细胞(Treg)在一小群想像中平稳重大突破者之中的构造，他们的同期为43岁(31-72岁)，随访间隔时间为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以这群人辅以的纵向研究课题，在21岁此表确诊的腹泻亲属之中检查1HG白血病的危险考量。我们此前所述了仍然平稳重大突破者的构造，他们保证多重肝细胞自身免疫之中性多达10年，但未不止现白血病的针灸腹泻，太快性或非顺利癫痫自身免疫。随后，10名独自保证无白血病并愿意获取大量血液抽取的平稳重大突破者纳入T和B巨噬细胞功能分析。在目前的研究课题之中，8名太快重大突破者(SP小组)，之中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肝细胞自身免疫之中性。所有的发起者都处于1HG白血病重大突破的1期，尽管一些人随后丧失了肝细胞自身免疫对某些上皮细胞的之中性反应，然而，一名腹泻早已处于2期将近6年，但未不止现针灸腹泻，一名腹泻被确诊为白血病，该成年人72岁，在采集检验抽取时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在数据分析之中对该NADPH顺利进行了单独评量。除去外周血单个核巨噬细胞(PBMCs)，选用多参数流式巨噬细胞忍术和T巨噬细胞消除试验评量NADPH之中Treg的Hz、表HG和功能。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类确认、表征和紧接著)顺利进行无督导聚类分析，评量Treg表HG。

结果：与身心健康NADPH来得，来自太快重大突破体的遗忘CD4+T巨噬细胞的督导聚类结果显示，启动时的遗忘CD4+ TregHz缩减，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)解读缩减有关。一名HbA1c急剧下降的腹泻与重大突破平稳者和比如说的对照小组来得，Treg著者有所相同。功能分析证明，与身心健康NADPH来得，来自平稳重大突破体的Treg介导的CD4+畸变T巨噬细胞消除值得注意毁损。展示出为对畸变CD4+T巨噬细胞CD25和CD134解读的消除缩减。

平面图1 全面性的表HG分析结果显示，CD4+Treg亚HG在太快重大突破配置文件之中缩减。由FlowSOM作用于的Treg过道，聚集在来自所有NADPH的能活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标识物解读确认不止10个元簇:遗忘T巨噬细胞_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +遗忘T巨噬细胞;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)应用于9个相同Treg标识作用于的10个元簇的MST。每个键值推选一个一个大(100个一个大)，更大的元一个大(10个元一个大)在键值小组远处上色。每个键值之中的面包平面图对此单个标识的解读级别。(b)每个元聚类的热平面图，以结果显示整体标识解读。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)作用于平面图，以及FlowSOM定位的每个元簇的覆盖层。(e-l)来得之下轻元素为每个metacluster筒终点站平面图(轻元素> 0.05%)断定为HD和SP小组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T巨噬细胞(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T巨噬细胞(l)。红色圆圈推选**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对表示法秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 应用于CITRUS的预测模HG猜测，TregHz的缩减是重大突破平稳的标志。这两项门控(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP发起者和比如说的HD发起者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的相异。(a)未成熟CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的推选性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读顺利进行除去，模拟器FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)小组以及NADPHSP 606(红色)之中CD25+ cd127的Hz汇总平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控三闭包的筒终点站平面图;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读风速着色，左下角突不止的簇被定位为SP和HD配置文件之间的相同。(j)筒终点站平面图结果显示了在SP(蓝点)和HD(灰点)小组之中，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的来得之下轻元素(总和)。(k)直方平面图结果显示每个簇的表HG(粉红色)和Treg标识来得之下解读与背景解读(蓝色);上列，磁盘Treg_3;下面恰巧，磁盘Treg_4。背景与所有其他簇之中标识的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对表示法秩检验

平面图3 与身心健康献血者来得，重大突破平稳者遗忘treg的GITR缩减。每个遗忘CD4+T巨噬细胞元簇(遗忘T巨噬细胞_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +遗忘T巨噬细胞;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个解读标识的发生变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的解读热平面图(sp606不包含在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇之中所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR解读串联，结果显示直方平面图(c)和汇总平面图(d)。Wilcoxon配对表示法秩和检验，p< 0.07(红色)所有NADPH包含，p< 0.05(蓝色)NADPHSP 606和比如说的HD不包含在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR解读，从这两项门控，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(红色)串联，结果显示直方平面图(e)和汇总平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对表示法秩检验

平面图4 来自平稳重大突破的CD4+ treg巨噬细胞控制畸变CD4+T巨噬细胞的并能下降。SP小组用蓝色的终点站和圆圈对此，HD小组用银色的终点站和圆圈对此，红色的终点站/圆圈对此NADPHsp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞顺利进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标识为CFSE, Treg按仔细观察的总和溶液。用抗CD3 /28微珠抑制巨噬细胞，培训3紧接著顺利进行流式巨噬细胞忍术扫描。(a-d)与CD4+反之亦然者来得之下应的treg培训(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者培训。(a,b,f) CFSE抑制(a,e)和CFSE消除总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除总和。应用于之中性对照(启动时的响应巨噬细胞都有treg)计算消除总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 畸变CD4+T巨噬细胞对平稳重大突破的T巨噬细胞抑制的消除更敏感。SP小组用蓝色的终点站和圆圈对此，HD小组用银色的终点站和圆圈对此，红色的终点站/圆圈对此NADPHsp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞顺利进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标识，treg按仔细观察的总和溶液。用抗CD3 /28微珠抑制巨噬细胞，培训3紧接著顺利进行流式巨噬细胞忍术(CD25反染)和巨噬细胞因三子分析。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者协力培训。(a,b) CFSE抑制(a)和CFSE消除百份(b)。(c,d) CD25消除百份(c)和CD134消除百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在名教授之中的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

假设：我们给不止的假设是，来自平稳重大突破三子的抑制遗忘CD4+Treg在GITR解读之中得到了扩展和丰富，强调了进一步研究课题Treg在1HG白血病效用个体之中的异质性的必要性。

原文不止处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28